水質葉綠素a的測定方法

葉綠素是植物光合作用中的重要光合色素，通過測定浮游植物葉綠素，可掌握水體的初級生產力情況。浮游藻類里常見的葉綠素有a、b、c、d四種類型，其中，葉綠素a在一切浮游藻類里大約占有機物干質量的1%~2%，是環境監測中表征浮游植物生物量最常用的指標之一，所以常被用于研究地表水環境的富營養化。同時，葉綠素a也被用來評價水體富營養化水平，以及衡量水體水質。下面我們來看一下水質葉綠素a的測定方法有哪些。

1、分光光度法

分光光度法屬于光度法的一種，該分析方法采用的原理是物質分子對光具有選擇吸收的特性。葉綠素a的最大吸收峰位于663nm，在一定濃度范圍內，其吸光度與濃度符合朗伯-比爾定律，可根據吸光度-濃度之間的線性關系，計算葉綠素a的濃度。

2、熒光光譜法

葉綠素分子被紫外光照射后可發射出特征紅色熒光，其熒光強度與葉綠素濃度呈正比，據此可釆用熒光法進行葉綠素a的定量分析。普通萃取熒光法的操作步驟主要為標準溶液的配制、標準曲線的制定和樣品熒光強度的測定。將提取的新鮮綠色植物液中的葉綠素作為儲備液，用分光光度法標定其濃度：將標準儲備液稀釋配制成標準系列，用熒光光度計測定標準系列的熒光強度，繪制葉綠素a標準曲線；由樣品測得的熒光強度從葉綠素a標準曲線上查得相應濃度。

3、色譜法

高效液相色譜(HPLC)法是一種廣泛應用于化學、醫藥、生命科學等領域的分析手段。使用高效液相色譜法測定葉綠素a時，需要破壞測定藻類的原樣，前處理方法與分光光度法的前處理方法相似。

4、遙感監測

水質遙感監測是通過監測一定波長范圍內的水體輻射值，定量分析水體反射光譜特征與水質指標間的關系，進而構建水質指標反演算法的一類方法體系。遙感技術測定葉綠素a近年來已經被國內外許多學者證實具有監測范圍廣、速度快、成本低和便于進行長期動態監測的優勢。

5、pH值法

pH值法是研究水域生態系統初級生產量的又一種方法。該方法測定原理主要是依據初級生產量與溶于水中的二氧化碳有定的關系，即水體中的pH值是隨著光合作用中吸收二氧化碳和呼吸過程中釋放二氧化碳而發生變化的。使用pH電極連續記錄水體的pH值變化，由此分析光合量和呼吸量，從而來估計初級生產力。

葉綠素a的測定方法有分光光度法、熒光光譜法、色譜法和遙感監測等方法，其中，分光光度法和熒光光譜法應用最為廣泛。其實對于水質葉綠素a監測方法的選取，應根據實際情況進行選擇，綜合考慮多種因素，如研究目的、對樣品前處理精度要求、樣品種類的要求、儀器靈敏度要求、儀器成本等。