四種葉綠素測定方法簡析

葉綠素含量是植物生長環節中的重要生理指標。由于它對周圍環境非常敏感，與植物的光合作用和養分吸收密切相關，因此被廣泛用作植物生長的常規測量指標項目。葉綠素含量的測定方法有很多，國際上普遍采用傳統的Arnon法（又稱研磨法）。但這種方法需要將植物材料研磨后進行轉移、過濾或離心處理，不僅工作量大，而且不可避免地使檢測人員長時間接觸空氣中揮發的試劑，對人體危害較大。近年來，直接浸取法受到重視，用不同比例的混合液提取葉綠素，證明了混合液提取的可行性，對傳統的Arnon法進行了改進，將樣品冷凍處理后，用50℃丙酮靜置萃取計量，大大提高了工作效率。

(1)研磨法：稱取0.5g試樣于研缽中，加入少量CaCO3和5mL 80%丙酮，充分研磨至白色（約5min），轉移至10mL帶塞離心管中，定容至刻度，搖勻后置于4℃冰箱中12 h，離心10 min（2000 r/min），取上清液測定。

(2)直接浸取法：稱取試樣0.5g于10mL帶塞離心管中，用80%丙酮定容至刻度，于暗柜中靜置72h浸取，取上清液測定。

(3)樣品冷凍后50℃提取液提煉法：稱取0.5g樣品于10mL帶塞離心管中，放入冰箱冷凍2小時，取出后加入10mL在水浴鍋中加熱至50℃的80%丙酮。充分搖勻后，在暗柜中靜置4h，取上清液測定。

(4) 葉綠素檢測儀：葉綠素檢測儀是所有方法中zui快的。您只需手持葉綠素檢測儀，將葉片插入儀器的感應部位，然后關閉測量探頭即可。用于此測量的儀器也稱為便攜式葉綠素檢測儀，因為葉綠素檢測儀機身小巧，可以輕松攜帶到野外進行測量。

在上述測定方法中，直接浸取法提取效果zui好，但耗時較長，傳統研磨法葉綠素的損失較大，冷凍后用50℃提取液提煉法操作簡便且提煉速度較快，在提煉率和穩定性方面均顯示良好的優越性。冷凍后用50℃提取液提煉法的比較好的試驗條件為將試驗材料冷凍1h后，靜置提煉3h。與其他三種化學方法相比，葉綠素檢測儀更快、更方便。而且，用葉綠素檢測儀測量葉綠素含量時，不會對葉片造成傷害，這也是使用葉綠素檢測儀的另一大優勢。因為不需要摘葉，可以直接用儀器夾住葉子進行測量，這樣就可以在作物生長的全過程中對具體的葉子進行監測，進而獲得更科學的分析結果。